Pregnenolon jest biochemicznie prohormonem. Jest wytwarzany bezpośrednio z cholesterolu w mitochondriach nadnerczy oraz, w mniejszym stopniu, w układzie nerwowym, za pomocą enzymu rozszczepiającego łańcuch boczny cholesterolu, p450scc. Pregnenolon jest prekursorem różnych hormonów, takich jak progesteron, mineralokortykosteroidy, glikokortykosteroidy, androgeny i estrogeny. Dzięki temu może pomóc organizmowi utrzymać prawidłowy poziom hormonów, co z kolei wspomaga wiele funkcji organizmu.